Кредит: Pixabay/CC0 Public Domain
Ученые разработали новый способ подсчета меченых белков в живых клетках, который может стать стандартным и ценным инструментом в области биомедицинских исследований.
Эта новая мощная технология, известная как степень маркировки белковых меток (ProDOL), обеспечивает надежный и универсальный подход для точного определения эффективности маркировки, количества белков, маркированных флуоресцентными маркерами в живых клетках, в микроскопии, что является важнейшим аспектом количественной оценки белков в биологических исследованиях.
Метод был разработан группой исследователей из Cardiovascular Sciences и Школы химии в Университете Бирмингема в сотрудничестве с несколькими международными институтами. Результаты, которые подчеркивают потенциал ProDOL для значительного повышения точности и надежности маркировки белков, были опубликованы в недавнем исследовании, опубликованном в Nature Methods.
Флуоресцентная микроскопия долгое время была краеугольным камнем в области биомедицинских исследований, позволяя ученым обнаруживать и анализировать белки внутри клеток. Однако точность этих анализов во многом зависит от способности определять, сколько белков помечено флуоресцентными маркерами, параметр, известный как степень маркировки (DOL). Существующие методы измерения DOL имеют ограничения, часто приводящие к переменной эффективности маркировки и неспецифическим сигналам.
«ProDOL предназначен для решения этих проблем, предоставляя быстрый и надежный метод количественной оценки эффективности маркировки», — сказал профессор Дирк-Питер Хертен, ведущий исследователь сердечно-сосудистых наук Университета Бирмингема. «Этот инструмент позволяет оптимизировать стратегии маркировки белковых меток и обеспечивает точные измерения количества копий белка в клеточных структурах».
«Благодаря доказанной точности и адаптируемости ProDOL станет стандартным и ценным инструментом в области биомедицинских исследований, открывая путь для более точных и глубоких исследований клеточных функций. Он также очень универсален, что делает его применимым к различным клеткам. типы и условия эксперимента.
«В будущем это может, например, улучшить наше понимание клеточных сигнальных процессов при активации иммунных клеток или тромбоцитов, которые имеют значение в контексте различных заболеваний, в том числе не ограничиваясь воспалением, иммунодефицитом и различными сердечно-сосудистыми заболеваниями».
Реальные применения и будущие направления
В исследовании ProDOL применялся для изучения того, как вирус ВИЧ-1 влияет на реакцию иммунных клеток CD4 T.
В сотрудничестве с профессором Оливером Факлером из отделения инфекционных заболеваний, интегративной вирусологии в университетской больнице Гейдельберга была продемонстрирована эффективность ProDOL в измерении общего и активированного числа копий путем подсчета как общего, так и активного числа вспомогательных белков в крошечных сигнальных кластерах иммунных клеток.
Кроме того, профессор Урсула Клингмюллер из отдела системной биологии передачи сигналов Немецкого центра исследований рака (DKFZ) внесла свой вклад в разработку зондов для приложений с живыми клетками, обеспечив надежность и применимость метода в динамических биологических системах.
Дополнительная информация: ProDOL: общий метод определения степени маркировки для оптимизации хранения и молекулярного подсчета, Nature Methods (2024). DOI: 10.1038/s41592-024-02376-6
Информация о журнале: Nature Methods
Предоставлено Университетом Бирмингема
